細胞凍存

“冬眠"指南

- SOLARBIO-

為什么把細胞“凍起來"

01防老化

SOLARBIO長期傳代細胞細胞容易老化，甚至表型改變，導致實驗數(shù)據(jù)難以復刻。因此細胞在短期/長期不使用時，凍存是最佳儲存方式，同時還能節(jié)約培養(yǎng)試劑及耗材。

02防污染

SOLARBIO霉菌、支原體、細菌虎視眈眈，操作或者環(huán)境一個沒注意，細胞可能就要和你說拜拜，而凍存就等于把細胞送進"防空洞"。

03防意外

SOLARBIO培養(yǎng)箱斷電斷二氧化碳細胞嘎掉了，沒來得及接種細胞就不小心被當廢液給倒了，新手操作不熟練細胞被酒精燈烤死了等等，面對這些大無語事件，凍存管里那管"火種"就是你翻盤的最后希望。

凍存是細胞的"時間膠囊"

是實驗人的"后悔藥"

凍存四部曲

細胞狀態(tài)確認

“冷宮"不是誰想進，說進就能進。

合格細胞的三項硬指標：

l 對數(shù)生長期：

80%-90%匯合度、活力四射、正值分裂期的細胞。

l 高活力：

細胞活率大于90%。

l 無污染：

細菌、真菌、支原體、黑膠蟲退！退！退！

什么細胞不能凍？

l 細胞滿到?jīng)]縫了，甚至成片漂起來的。

（細胞平臺期，停止增殖）

l 剛復蘇就凍存。

（狀態(tài)還沒穩(wěn)，至少穩(wěn)定傳代個1-2次）

l 過度消化。

（吹得時候都見到白色絮狀物了，狀態(tài)受損）

l 細胞形態(tài)明顯異常，增殖速度突然緩慢。

（警惕污染）

新獲得的細胞株要在傳代早期

就凍存保種，建議10代內完成

凍存液選擇

細胞怕的不是冷，而是冰晶形成帶來的毀滅性傷害。

凍存液的核心任務：讓細胞在降溫時慢慢脫水，別結大冰渣子。

經(jīng)典配方（絕大部分細胞通用）

“90% FBS + 10% DMSO"，對于免疫類細胞，可適當提高血清濃度至92%。

經(jīng)濟適用版（推薦皮實型細胞）

“10% DMSO +40%完-全培養(yǎng)基+50% FBS"組合，性價比高，但保存效果略差于經(jīng)典血清加DMSO組合。

進階版

商業(yè)化無血清凍存液：尤其適用于無血清體系培養(yǎng)的細胞。

凍存密度

凍太少了：復蘇后稀稀拉拉，養(yǎng)半個月才能傳代。

凍太多了：凍存液不夠用，細胞互相壓死，DMSO毒性疊加。

凍存需有度，拿捏請看下表

索萊寶凍存建議

細胞培養(yǎng)老手推薦：

1個T25凍存1只，1個10cm皿凍存2只

凍存流程

一步一步進入“冷宮"。

Step 1：收集對數(shù)期細胞

輕柔吹打，溫和離心（1000-1200 rpm，5min），注意，細胞是去冬眠的，不是去殉職的哦！

Step 2：重懸分裝，快準狠

調整適宜密度，使用凍存液重懸細胞，均勻分裝到凍存管。

注意凍存液現(xiàn)用現(xiàn)配或使用商業(yè)化試劑均可，若含有DMSO成分，因具有一定毒性，加入后切勿在室溫放置太久，加好建議立即轉移凍存！

Step 3：標記——細胞"身-份證"建立

細胞名稱、凍存日期、凍存代數(shù)，都是后續(xù)認親鐵證！

Step 4：降溫——細胞的"入睡儀式"

理想速度：-1℃/min，直至-80℃，然后轉移進液氮長期保存。

科研不易，凍存且珍惜！

結語：細胞凍存四部曲，說到底是

選對細胞、配好液、調準數(shù)、控好溫