親和層析填料 rProtein A Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)（純化樹(shù)脂）
貨號(hào) ：R8290
規(guī)格 ：5ml
保存 ：2-8℃

產(chǎn)品 介紹 ：
     Protein A 是一種分離自金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁蛋白， 主要通過(guò) Fc 片段結(jié)合哺乳動(dòng)物IgG，但是不與狗 lgG 結(jié)合，不結(jié)合人 lgM、lgD 和 IgA。蛋白 A 與蛋白 G 不同來(lái)源及亞類(lèi)的免疫球蛋白結(jié)合能力丌一樣，具體見(jiàn)表。天然 Protein A 有五個(gè) IgG 結(jié)合區(qū)域和一些未知功能的區(qū)域，重組 protein A 去除了與白蛋白及細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn)，只含有五個(gè) IgG 結(jié)合區(qū)域，減少了非特異性吸附。

rProtein A Beads  產(chǎn)品性能 ：

  Protein A  和   Protein G  對(duì)不同抗體的結(jié)合能力   ：

++++=結(jié)合能力強(qiáng)；  ++=結(jié)合能力中等；  —=結(jié)合能力弱或沒(méi)有結(jié)合 

純化流程 ：
1 、Buffer  的準(zhǔn)備

所用水和 Buffer 在使用之前建議用  0.22µm 或 0.45 µm 濾膜過(guò)濾。 
結(jié)合/ 洗雜  Buffer:   0.15M NaCl，  20 mM Na 2 HPO 4 ，  pH 7.0
洗脫  Buffer: 0.1M 甘氨酸，  pH 3.0
中和液：   1M Tris-HCl， pH8.5

2 、 樣品準(zhǔn)備
     上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和 pH 值， 可以用結(jié)合/洗雜緩沖液對(duì)血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋?zhuān)蛘邩悠酚媒Y(jié)合/洗雜緩沖液透析。
     樣品在上樣前建議離心或用  0.22µm 或 0.45µm 濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。 
3 、 樣品純化
    1) 將 rProtein A Beads 裝入合適的層析柱，層析用 5 倍柱體積的結(jié)合 Buffer 進(jìn)行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。 
    2) 將樣品加到平衡好的 rProtein A Beads 中（保證目的蛋白與 rProtein A Beads 充分接觸，提高目的蛋白的回收率） ，收集流出液。 
    3) 用 10-15 倍柱體積的洗雜 Buffer 進(jìn)行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。    

    4) 使用 5-10 倍柱體積的洗脫  Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。 
    5) 依次使用 3 倍柱體積的結(jié)合  Buffer 和 5 倍柱體積的去離子水平衡填料，后再用 5 倍柱 體積的 20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的 20%的乙醇中，置于 4 度保存，防止填料被細(xì)菌污染。


4 、   SDS-PAGE  檢測(cè)
    將使用純化產(chǎn)品得到的樣品（包括流出組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品使用SDS-PAGE 檢測(cè)純化效果。 

填料清洗
    rProtein A Beads 可以重復(fù)使用而無(wú)需再生， 但隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，嚴(yán)重影響柱子的性能，這時(shí)需要對(duì)樹(shù)脂進(jìn)行清洗。
去除一些沉淀或變性物質(zhì)用 2 倍柱體積的 6M 鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗，然后立即用 5 倍柱體積的   PBS, pH 7.4 清洗。
    去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)
    用 3-4 倍柱體積的 70%乙醇或 2 倍柱體積的 1% Triton  X-100 清洗，然后然后立即用 5倍柱體積的   PBS, pH 7.4 清洗。 

問(wèn)題及解決方案

親和層析填料 rProtein A Beads瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)（純化樹(shù)脂）訂購(gòu)說(shuō)明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運(yùn)輸說(shuō)明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。