北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC3990-50T/24S
更新時間：2024-04-12
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：937
010-50973130
產品分類
土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC3990
規(guī)格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體3mL×1 瓶（自備） | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×2瓶 | -20℃保存 |
試劑四 | 2-8℃保存 | |
標準品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：甲苯自備；
2、 試劑三：臨用前取1瓶加入10mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存一周，避免反復凍融；
3、 標準品：5mmol/L的對硝基苯*溶液。臨用前用試劑二將標準品稀釋50倍得100μmol/L的標準溶液。（具體稀釋過程見操作步驟）
產品說明：
土壤芳基硫酸酯酶來自于土壤微生物，能酶促土壤有機硫化物轉化為植物可吸收的無機態(tài)硫，在硫素的生物化學循環(huán)和植物的硫營養(yǎng)代謝中具有重要的作用，是反映土壤質量的一個重要生物學指標。
S-ASF能夠催化對-硝基苯硫酸鉀生成對-硝基苯*，后者在410nm有特征光吸收。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、臺式離心機、恒溫水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調式移液器、研缽、冰、30-50目篩、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30-50目篩。
二、測定步驟
1、 分光光度計預熱30min，波長調至410nm，蒸餾水調零。
2、 標準溶液的稀釋：取20μL 5mmol/L的對硝基苯*溶液，加入980μL試劑二，充分混勻，配制成100μmol/L標準液待測，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實驗中每管需要500μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）
3、 加樣表：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
風干土樣（g） | 0.1 | 0.1 | - | - |
試劑一 | 50 | 50 | - | - |
充分振蕩混勻，使土樣全部潮濕，室溫放置15min | - | - | ||
試劑二 | 500 | 500 | - | - |
試劑三 | 400 | - | - | - |
充分混勻，置于37℃水浴鍋或37℃恒溫培養(yǎng)箱反應1h后，立即沸水浴5min（蓋緊，纏封口膜，防止水分散失），流水/冰浴冷卻。 | - | - | ||
試劑三 | - | 400 | - | - |
10000rpm，25℃離心10min，取上清液待測 | - | - | ||
上清液 | 500 | 500 | - | - |
標準品 | - | - | 500 | - |
蒸餾水 | - | - | - | 500 |
試劑四 | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
充分混勻，常溫靜置2min后，吸取1mL反應液于1mL玻璃比色皿中，測定吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管。計算ΔA測定=A 測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設一個對照管。標準管和空白管只需檢測1-2次。
三、S-ASF活力計算
單位的定義：每天每g土樣中產生1μmol對-硝基苯*定義為一個酶活力單位。
S-ASF活力（U/g 土樣）=ΔA測定÷ (ΔA標準÷C標準)×V反總÷W÷T=2.28×ΔA測定÷ΔA標準÷W
T：反應時間，1h=1/24d；V反總：反應體系總體積：9.5×10-4L；C標準：標準溶液濃度，100μmol/L；W：樣本質量，g。
實驗實例：
1、 分別稱取兩管0.1g三葉草土樣，分別記為測定管和對照管，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.627-0.108=0.519，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.568-0.002=0.566，計算酶活得：
S-ASF活力（U/g 土樣） =0.456×ΔA測定÷ΔA標準÷W=2.28×0.519÷0.566÷0.1=20.9067 U/g 土樣。
2、 分別稱取兩管0.1g土樣，分別記為測定管和對照管，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.442-0.102=0.34，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.568-0.002=0.566，計算酶活得：
S-ASF活力（U/g 土樣） =0.456×ΔA測定÷ΔA標準÷W=2.28×0.34÷0.566÷0.1=13.69611 U/g 土樣。
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