馬外周血單個核細(xì)胞分離液試劑盒

貨號：P4450
規(guī)格：200ml/KIT
保存：室溫避光儲存，有效期少 2 年。

產(chǎn)品組成：

名稱                                 規(guī)格
各種動物外周血單個核細(xì)胞分離液       100ml×2
全血及組織稀釋液（贈品）             100ml
細(xì)胞洗滌液（贈品）                   100ml

產(chǎn)品簡介：
    本分離液為Ficoll、羥乙基淀粉550與泛影酸葡甲胺的混合液?？鼓庵苎稍诜蛛x液中分層。離心時，在Ficoll、羥乙基淀粉的作用下紅細(xì)胞與粒細(xì)胞聚集并迅速沉降；此時，單個核細(xì)胞仍處于分離液上層，紅細(xì)胞污染可忽略不計。大部分血小板可在細(xì)胞清洗低速離心過程中去除。 其他人及動物多種比重細(xì)胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。
適用于從動物抗凝血液中分離單個核細(xì)胞，無菌條件下所分離的單個核細(xì)胞可用于細(xì)胞培養(yǎng)等。本品僅供科研使用。

器材和設(shè)備 ：
    400g離心力的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)、15ml玻璃離心管、吸管等。

注意事項：
    A．本實驗要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時呈較高密度，在高溫時呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液復(fù)溫18-22℃。為獲得佳的實驗結(jié)果，好在取血后2小時內(nèi)進(jìn)行實驗，血液提取后存放時間越長細(xì)胞活性越低。
    B．實驗過程中，如需稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。
    C．優(yōu)抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素，其他抗凝劑也可使用，但會影響細(xì)胞活性。應(yīng)注意在血液稀釋過程中去除抗凝劑體積。
    D．當(dāng)血液樣本粘度過高或血液樣本大于等于3ml時，優(yōu)稀釋方法：將血液于18-22℃以250g離心10分鐘，棄去血漿，補充添加全血及組織稀釋液，添加量為所棄去血漿體積的1.5-2倍，混勻備用。注：不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞档图?xì)胞得率及活性。
    E．實驗操作時，不可使用含粉手套、不可使用內(nèi)毒素含量過高的液體，手套中的粉末顆粒及高內(nèi)毒素會激活淋巴細(xì)胞從而降低細(xì)胞得率及活性。
    F．本實驗不可使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，其帶有的靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁影響分離效果。推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。
    G．吸取過多的單個核細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。吸取過多的單個核細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。
    H．如需進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，則需血液貯藏時間不得多于10小時，否則將導(dǎo)致細(xì)胞被激活，得率降低。
    I．為去除所混雜的血小板，可在分離液上層加上4-20%蔗糖梯度等滲溶液進(jìn)行二次離心。
    J．細(xì)胞純度可在步驟10后使用瑞氏染色方法確定，細(xì)胞活性可用臺盼藍(lán)處理后觀察。

    K．由于各品牌離心機(jī)的性能不同，國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，摸索佳的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。
 

分離方法 ：
     一、當(dāng)血液樣本小于3ml時，實驗方法如下：
     1. 取一支15ml離心管，加入3ml分離液置于18-22℃復(fù)溫。
     2. 將血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22℃，400g離心20分鐘。低溫（如4℃）離心會降低細(xì)胞得率。
     3. 離心后，用吸管小心吸出分離液上層（包含單個核細(xì)胞的細(xì)胞層）0.5cm以上的上清液部分，棄去。
     4. 用吸管小心吸取分離液層及淋巴細(xì)胞層于另一新離心管內(nèi)。
     5. 在步驟4中所得離心管中加入10ml細(xì)胞洗滌液混勻。
     6. 250g離心10分鐘。
     7. 棄上清。
     8. 用吸管以5ml細(xì)胞洗滌液重懸所得細(xì)胞。
     9. 250g離心10分鐘。
     10. 棄上清。重復(fù)步驟7、8、9，后以0.5ml后續(xù)試驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

二、當(dāng)血液樣本大于3ml時，實驗方法如下：
     1. 首先按“【注意事項】D項”所述方法稀釋血液樣本。
     2. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，加入分離液（加入量與稀釋后的血液樣本體積相等），置于18-22℃復(fù)溫。
     3. 將經(jīng)稀釋處理的血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22℃，400g離心20分鐘。低溫（如4℃）離心會降低細(xì)胞得率。注：加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二。
     4. 剩余步驟同“情況一”中步驟3步驟10。

產(chǎn)品性能 指標(biāo) ：
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
無菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10µm 以上的不溶性微粒20 粒以下，
含25µm 以上的不溶性微粒5 粒以下

貯藏及保存期限 ：
     本分離液是敏光型的，應(yīng)在18℃-25℃避光保存，有效期兩年。啟封后置4℃保存，溶液變渾濁或污染細(xì)菌時，產(chǎn)品失效。保存溫度較低（10℃以下）時分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

馬外周血單個核細(xì)胞分離液試劑盒訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。