尿酸酶活性檢測試劑盒抗氧化

產(chǎn)品簡介：

儲存條件
-20℃
中文名稱
尿酸酶活性檢測試劑盒抗氧化
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Uricase Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號：BC4430-50T/24S

更新時間：2024-04-16

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1130

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

尿酸酶活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號：BC4430

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體10 mL×1瓶	-20℃保存
試劑三	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑四	液體12 mL×1 瓶	2-8℃保存
標準品	液體102 μL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1、標準品：臨用前加入898 µL蒸餾水得到1 mmol/mL的過氧*氫溶液，2-8℃保存4周。

2、工作液A的配制：按照試劑二：試劑三：試劑四 = 0.85mL：2.55mL：1.7mL（共5.1mL，6S）的比例配制，用于樣本測定管、空白管及標準管的檢測。根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用，配后建議2小時內(nèi)用完（2-8℃或者冰上保存）。

3、工作液B的配制：按照試劑二：試劑三：試劑一 = 0.85mL：2.55mL：1.7mL（共5.1mL，6S）的比例配制，用于樣本對照管的檢測。根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用，配后建議2小時內(nèi)用完（2-8℃或者冰上保存）。

產(chǎn)品說明：

尿酸酶，又名尿酸*化酶，是一種參與嘌呤降解途徑的氧化酶，可以將尿酸分解為尿囊酸素進而排出體外。尿酸為嘌呤代謝的終末產(chǎn)物，積累過多將導(dǎo)致痛風(fēng)、腎病、心血管疾病等多種疾病的發(fā)生。尿酸酶在尿酸相關(guān)疾病的臨床檢測以及治療中有著重要意義。

尿酸酶催化尿酸分解為尿*素、CO₂和H₂O₂，H₂O₂氧化亞鐵*中的Fe²⁺生成Fe³⁺，Fe³⁺進一步與4-氨基安*比林和酚反應(yīng)生成紅色醌類化合物，在505 nm處有特征吸收峰，通過測定505 nm處的吸光值來反映尿酸酶的活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超

聲破碎儀、冰、EP管、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

組織：按照組織質(zhì)量（g）: 提取液體積（mL）為1 : 5~10的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1 mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000 rpm，4℃，離心10 min，取上清置于冰上待測。

細菌或細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴個）: 提取液體積（mL）為500~1000 : 1的比例（建議500萬個細菌或細胞加入1 mL提取液），冰浴超聲波破碎細菌或細胞（功率200 W，超聲3 s，間隔7 s，總時間5 min）；然后10000 rpm，4℃，離心10 min，取上清置于冰上待測。

二、測定步驟

1、分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至505 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將1 mmol/mL 標準液用蒸餾水稀釋為0.25 µmol/mL的標準溶液備用。標準溶液的稀釋：取20μL 1mmol/mL*標準液，加入1980μL蒸餾水，充分混勻，配制成10μmol/mL標準液，再取50μL 10μmol/mL*標準液，加入1950μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.25μmol/mL標準液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實驗中每管需要150μL，為減小實驗誤差，故配制大體積）。

3、操作表：(在1.5 mL離心管中)

試劑名稱（µL）	對照管	測定管	標準管	空白管
樣本	150	150	-	-
標準溶液	-	-	150	-
蒸餾水	-	-	-	150
工作液A	-	850	850	850
工作液B	850	-	-	-
混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）恒溫培養(yǎng)箱中準確反應(yīng)30 min。于1 mL玻璃比色皿，測定505 nm處吸光值A，分別記為A對照管、A測定管、A標準管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管，標準管和空白管只需測1-2次。

三、尿酸酶活性計算

（1）按樣本質(zhì)量計算

酶活定義：在pH 8.8的條件下，每克樣本每小時分解尿酸產(chǎn)生 1 μmol 的H₂O₂定義為一個酶活力單位。

尿酸酶酶活（U/g 質(zhì)量）= ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×V樣本÷（W×V樣本÷V提取）÷T

= 0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W

（2）按蛋白濃度計算

酶活定義：在pH 8.8的條件下，每毫克蛋白每小時分解尿酸產(chǎn)生 1 μmol 的H₂O₂定義為一個酶活力單位。

尿酸酶酶活（U/mg prot）= ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×V樣本÷（Cpr×V樣本）÷T

= 0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr

（3）按照細菌或細胞數(shù)量計算

酶活定義：在pH8.8的條件下，每10⁴個細菌或細胞每小時分解尿酸產(chǎn)生 1 μmol 的H₂O₂定義為一個酶活力單位。

尿酸酶酶活（U/10⁴cell）= ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×V樣本÷（N×V樣本÷V提?。?/span>÷T

=0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷N

C標準：標準溶液濃度，0.25 µmol/mL；V樣本：加入的樣本體積，0.15 mL；V提取：提取液體積，1 mL；T：酶促反應(yīng)時間：0.5 h；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；N：細菌數(shù)量（以萬計）。

注意事項：

1、 A大于1時，建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定，并在計算時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

2、工作液A與工作液B，需根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用，配后建議2小時內(nèi)用完。工作液本身為淡黃色，隨著時間的延長，會變?yōu)榧t色，如有變色，則視為失效，需重新配制。

實驗實例：

1、取0.1g小鼠肝臟進行樣本處理，取上清稀釋8倍后按測定步驟操作，測定計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.652-0.218=0.434，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.614-0.017=0.597，按樣本質(zhì)量計算酶活得：尿酸酶酶活（U/g 質(zhì)量）= 0.5×ΔA÷ΔA標準÷W×8（稀釋倍數(shù)）=29.08 U/g 質(zhì)量。