谷*甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法 
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC0355
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液配制：
試劑三：臨用前加3 mL蒸餾水溶解，2-8℃保存4周。
產(chǎn)品說(shuō)明：
GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價(jià)結(jié)合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此，GST在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因?yàn)?span style="font-family: Times New Roman, Times, serif;">GST具有GSH-Px活性，亦稱(chēng)為non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST催化的反應(yīng)減少GSH含量，但是不增加GS SG含量。
GST催化GSH與CDNB結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)為340nm；通過(guò)測(cè)定340nm波長(zhǎng)處吸光度上升速率，即可計(jì)算出活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
自備儀器和用品：
紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)節(jié)移液器、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、微量石英比色皿/96孔UV板、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 樣本處理等過(guò)程均需要在冰上進(jìn)行，且須在當(dāng)日測(cè)定酶活力；

2. 細(xì)胞中GST活性測(cè)定時(shí)，細(xì)胞數(shù)目須在300萬(wàn)-500萬(wàn)之間，細(xì)胞中GST的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞；

3. 若樣本測(cè)定吸光度大于1，建議對(duì)樣本用蒸餾水稀釋?zhuān)?jì)算時(shí)結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；

4. 測(cè)定反應(yīng)的溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響，請(qǐng)將反應(yīng)溫度控制在37℃。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g月季花朵加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，稀釋50倍置冰上待測(cè)，按照測(cè)定步驟操作，使用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA =（A2測(cè)定-A1測(cè)定）-（A2空白-A1空白）=（0.7049-0.62）-（0.5902-0.5207）=0.0151，按樣本質(zhì)量計(jì)算得：

GST活性（U/g 質(zhì)量）=0.23×ΔA÷W×50（稀釋倍數(shù)）= 1.737 U/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g小鼠肺組織加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，稀釋50倍置冰上待測(cè)，按照測(cè)定步驟操作，使用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA =（A2測(cè)定-A1測(cè)定）-（A2空白-A1空白）=（0.9402-0.5059）-（0.5902-0.5207）=0.3648，按樣本質(zhì)量計(jì)算得：

GST活性（U/g 質(zhì)量）=0.23×ΔA÷W×50（稀釋倍數(shù)）=41.952 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Wensu Han,Yemeng Yang,Jinglin Gao,et al. Chronic toxicity and biochemical response of Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae) exposed to acetamiprid and propiconazole alone or combined. Ecotoxicology. May    2019:28(4):399-411.(IF2.46)

2. Le Guan,Muhammad Salman Haider,Nadeem Khan,et al. Transcriptome Sequence Analysis Elaborates a Complex Defensive Mechanism of Grapevine (Vitis vinifera L.) in Response to Salt Stress. International Journal of Molecular Sciences. December 2018;(IF4.183)

3. Xing Wei,Xuejun Mo,Faliang An,et al. 2′,4′-Dihydroxy-6′-methoxy-3′,5′-dim ethylchalcone, a potent Nrf2/ARE pathway inhibitor, reverses drug resistance by decreasing glutathione synthesis and drug efflux in BEL-7402/5-FU cells. Food and Chemical Toxicology. September 2018;(IF3.775)

4. Qiuli OuYang,Nengguo Tao,Miaoling Zhang. A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum. Frontier in Immunology. February 2018;(IF4.259)

5. Chunsheng Li,Xianqing Yang,Ying Xu,et al. Cadmium detoxification induced by salt stress improves cadmium tolerance of multi-stress-tolerant Pichia kudriavzevii. Environmental Pollution. November 2018;(IF5.714)

6. Xiao Hui Xu,Yinghui Guo,Hongwei Sun,et al. Effects of Phytase Transgenic Maize on the Physiological and Biochemical Responses and the Gut Microflora Functional Diversity of Ostrinia furnacalis. Scientific Reports. March 2018;(IF4.011)

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