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產(chǎn)品中心生化檢測(cè)試劑盒-常量法土壤系列BC2995-100T/48S土壤亞硝酸還原酶檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品型號(hào)：BC2995-100T/48S
更新時(shí)間：2025-08-26
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問(wèn) 量 ：2070
010-50973130
產(chǎn)品分類
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土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
貨號(hào)：BC2995
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體15mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存2周。臨用前根據(jù)用量用蒸餾水稀釋100倍，現(xiàn)用現(xiàn)配；
2、 試劑二：臨用前加15mL蒸餾水備用，2-8℃保存2周；
3、 試劑三：臨用前加15mL蒸餾水溶解，此溶液為飽和溶液，取上清使用即可。用不完的試劑2-8℃保存2周；
4、 標(biāo)準(zhǔn)品：10μmol/mL 亞*標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說(shuō)明：
土壤亞硝酸還原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）是反硝化作用中的關(guān)鍵酶之一，它是由土壤反硝化細(xì)菌產(chǎn)生的一種還原酶類，可將NO2-還原為NO，它的活性反映了生物降解過(guò)程中氮素的轉(zhuǎn)化效率，為氮素轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究提供一定的依據(jù)。
亞硝酸還原酶可將NO2-還原為NO，使樣本中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO2-減少，即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)土壤中亞硝酸還原酶的活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目篩、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱烘干，過(guò)30-50目篩。
二、測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
2、 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋至0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。
序號(hào) | 稀釋前濃度（µmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（µmol/mL） |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
3 | 1 | 120 | 80 | 0.6 |
4 | 1 | 200 | 300 | 0.4 |
5 | 0.4 | 200 | 200 | 0.2 |
6 | 0.2 | 200 | 200 | 0.1 |
7 | 0.1 | 200 | 200 | 0.05 |
備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需100µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3、 樣本測(cè)定：
試劑名稱 | 無(wú)基質(zhì)管 | 空白管1 | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管2 |
風(fēng)干土樣（g） | - | - | 0.05 | 0.05 | - | - |
蒸餾水（μL） | - | 100 | 100 | - | - | - |
試劑一（μL） | 100 | - | - | 100 | - | - |
試劑二（μL） | 100 | 100 | 100 | 100 | - | - |
充分混勻后，25℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)3h | - | - | ||||
試劑三（μL） | 100 | 100 | 100 | 100 | - | - |
旋渦震蕩30s，10000rpm，4℃，離心10min | - | - | ||||
上清液（μL） | 100 | 100 | 100 | 100 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)品（μL） | - | - | - | - | 100 | - |
試劑四（μL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
試劑五（μL） | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
蒸餾水（μL） | - | - | - | - | - | 100 |
充分混勻，室溫放置15min后吸取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中，測(cè)定540nm各管吸光值，分別記為A無(wú)基質(zhì)管、A空白管1、A對(duì)照管、A測(cè)定管、A標(biāo)準(zhǔn)管和A空白管2，計(jì)算ΔA測(cè)定=（A無(wú)基質(zhì)管-A空白管1）-（A測(cè)定管-A對(duì)照管），ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管2（標(biāo)準(zhǔn)曲線、無(wú)基質(zhì)管、空白管1、空白管2只需做1-2次）。 | ||||||
三、S-NiR計(jì)算
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測(cè)定（y，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，μmol/mL）。
2. S-NiR的計(jì)算：
酶活單位定義：每g土樣每天還原1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。
S-NiR（U/g 土樣）=x×V反應(yīng)÷W÷T=2.4×x÷W
T：反應(yīng)時(shí)間，3h=1/8d；V反應(yīng)：反應(yīng)體系體積，0.3mL；W：土樣質(zhì)量，g。
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