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產(chǎn)品中心生化檢測(cè)試劑盒-常量法氮代謝系列BC1500-50T/24S植物硝態(tài)氮檢測(cè)試劑盒 氮代謝
產(chǎn)品型號(hào)：BC1500-50T/24S
更新時(shí)間：2024-04-07
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1950
010-50973130
產(chǎn)品分類
植物硝態(tài)氮含量檢測(cè)試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號(hào)：BC1500
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前根據(jù)用量每瓶加入2 mL濃硫酸充分溶解；配制好后盡快使用，2-8℃可保存一周。
2、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg硝酸鉀，臨用前加入0.935 mL 蒸餾水溶解，配成1400 μg/mL的NO3-N標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明：
硝酸鹽是植物吸收的主要含氮物質(zhì)之一。硝酸鹽在植物體內(nèi)的還原部位不同，可以在根內(nèi)，也可以在枝葉內(nèi)進(jìn)行，且因植物類別和環(huán)境條件而異。因此，測(cè)定植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量變化對(duì)了解氮代謝機(jī)制有重要的意義。
在濃酸條件下，NO3-可以與水楊酸反應(yīng)，生成硝基水楊酸，后者在PH>12的條件下呈黃色，在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與含量成正比，可比色測(cè)定計(jì)算硝態(tài)氮含量。
技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.7534 μg/mL
線性范圍：0.875-84 μg/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、濃硫酸、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，室溫勻漿后置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min，期間不斷晃動(dòng)或者置于90℃恒溫?fù)u床中振蕩提取30min，待冷卻后于25℃，12000g離心15min，取上清待測(cè)。
二、測(cè)定步驟
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至410nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 將1400μg/mL NO3-N標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水50倍稀釋成28μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3. 操作表：
試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本（μL） | 40 | 40 | ||
標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL） | 40 | |||
蒸餾水（μL） | 60 | 40 | ||
試劑一（μL） | 60 | - | 60 | 60 |
充分混勻，25℃靜置30min | ||||
試劑二（μL） | 1400 | 1400 | 1400 | 1400 |
混勻，渦旋振蕩，使出現(xiàn)的沉淀充分溶解，取1mL于1mL玻璃比色皿中測(cè)定410nm處吸光值A，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。 | ||||
三、植物NO3-N的計(jì)算
1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算
NO3- N含量（μg/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷W=28×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
2. 按樣本蛋白濃度計(jì)算
NO3- N含量（μg/mg prot）=ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷（Cpr×V提取）=28×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
W：樣本質(zhì)量，g；C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，28μg/mL；V提?。?/span>樣本總體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。
注意事項(xiàng)：
1．試劑一和試劑二均具有強(qiáng)腐蝕性，操作時(shí)需做好防護(hù)措施。
2．如果樣本吸光值大于1.4，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、 取0.1g蘋果加入1mL蒸餾水進(jìn)行樣本處理，取上清后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.560-0.002=0.558，ΔA標(biāo)準(zhǔn)管=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.563-0.01=0.553，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：
NO3-N含量（μg/g質(zhì)量）=28×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=28×0.558÷0.553÷0.1=282.5 μg/g質(zhì)量。
2、 取0.1g葉片加入1mL蒸餾水進(jìn)行樣本處理，取上清后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.907-0.645=0.262，ΔA標(biāo)準(zhǔn)管=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.563-0.01=0.553，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：
NO3-N含量（μg/g質(zhì)量）=28×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=28×0.262÷0.553÷0.1=132.7 μg/g質(zhì)量。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：
[1] Fuyuan Zhu,Moxian Chen,Wailung Chan,et al. SWATH-MS quantitative proteomic investigation of nitrogen starvation in Arabidopsis reveals new aspects of plant nitrogen stress responses. Journal of Proteomics. September 2018;(IF3.537)
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0080/BC0085 硝酸還原酶（NR）活性檢測(cè)試劑盒
BC1450/BC1455 谷*酰胺酶（GLS）活性檢測(cè)試劑盒
BC1460/BC1465 谷*酸脫氫酶（GDH）活性檢測(cè)試劑盒
植物硝態(tài)氮檢測(cè)試劑盒 氮代謝 植物硝態(tài)氮檢測(cè)試劑盒 氮代謝
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